新聞動(dòng)態(tài)
旋光光譜常常被用來(lái)做手性化合物的定性或定量分析，它的作用在多肽或含氨基酸的化合物分析中尤為主要。最近我們遇到一個(gè)含有單一氨基酸的樣品，它的測(cè)試鑒定標(biāo)準(zhǔn)之一就是它的比旋光度。然而，圍繞著它的比旋光度，我們的測(cè)定結(jié)果與客戶得到的數(shù)據(jù)有較大的差異，因而對(duì)該化合物的質(zhì)量產(chǎn)生了歧見(jiàn)。對(duì)此我們做了一個(gè)較為全面的調(diào)研，發(fā)現(xiàn)主要的差異竟是來(lái)自常用的高標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑。
按照文獻(xiàn)我們對(duì)于這個(gè)化合物的比旋光度測(cè)定采用氯仿溶劑制備樣品，很自然地我們用了分析純 (AR)級(jí)別。然而當(dāng)我們的數(shù)據(jù)與客戶的數(shù)據(jù)顯示了很大的差異時(shí)，我們使用了更高級(jí)別的色譜（HPLC）級(jí)試劑重新配樣測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該化合物的比旋光度比原先的數(shù)據(jù)增大了很多。考慮到氯仿可能被光照氧化產(chǎn)生氯化氫（HCl）,進(jìn)而對(duì)化合物有影響，我們測(cè)了氯仿試劑的pH值，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)問(wèn)題。最終，我們查了氯仿的COA發(fā)現(xiàn)，AR級(jí)的氯仿試劑中含有一定含量的乙醇（國(guó)產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)0.3%-1%)，用來(lái)保證氯仿的穩(wěn)定性，而在國(guó)產(chǎn)HPLC級(jí)別的氯仿試劑中乙醇的含量沒(méi)有標(biāo)明，因此我們認(rèn)為是0%。一般的想法會(huì)認(rèn)為這么一點(diǎn)乙醇含量不會(huì)對(duì)比旋光度的測(cè)定有很大的影響，然而，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果卻展示了一個(gè)同樣的化合物在AR溶劑和HPLC溶劑中獲得的比旋光度有6%以上的誤差。為此，我們往AR級(jí)的氯仿試劑中添加了不同含量的乙醇，然后對(duì)該化合物做了一系列比旋光度測(cè)試，發(fā)現(xiàn)乙醇在氯仿中的含量對(duì)該化合物的比旋光度有很大的影響，見(jiàn)圖1。
一個(gè)同樣的化合物在AR溶劑和HPLC溶劑中分別獲得116.64 和124.36的比旋光度。這表明了在HPLC級(jí)氯仿試劑中，基本上確定了其中乙醇含量是或者接近于0%，我們所使用的AR級(jí)試劑中含有約0.75%的乙醇。不同的公司可能會(huì)按照自己的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程采用特定級(jí)別的試劑來(lái)配置測(cè)試樣品，這在企業(yè)之間交流時(shí)，一定要澄清核實(shí)。
表1 比旋光度與溶劑中乙醇占比關(guān)系趨勢(shì)
（不包含AR級(jí)試劑氯仿中本身的乙醇含量）
圖1 比旋光度與溶劑中乙醇占比關(guān)系趨勢(shì)
（不包含AR級(jí)試劑氯仿中本身的乙醇含量）
在這次調(diào)研過(guò)程中，我們還發(fā)現(xiàn)溶液中肉眼看不見(jiàn)的浮游小顆粒對(duì)旋光度測(cè)試的穩(wěn)定性有很大的影響。用了0.22um的有機(jī)過(guò)濾膜對(duì)樣品溶液過(guò)濾后，樣品檢測(cè)結(jié)果在儀器給出的測(cè)試數(shù)據(jù)的（小數(shù)點(diǎn)后3位）有效數(shù)內(nèi)完全一致，表現(xiàn)出了極高的重復(fù)性。
表2 HPLC級(jí)與AR級(jí)氯仿溶劑測(cè)試比旋光度結(jié)果差異
表3 樣品溶液過(guò)濾與不過(guò)濾導(dǎo)致的比旋光度結(jié)果差異（相同溶劑）
圖2 樣品溶液過(guò)濾與不過(guò)濾導(dǎo)致的比旋光度差異（相同溶劑）
這次問(wèn)題的發(fā)生和調(diào)研讓我們更深刻地體會(huì)到，制定測(cè)試條件非但要采用高標(biāo)準(zhǔn)的試劑和化學(xué)藥品，而且對(duì)所使用的材料物品包括試劑要有詳實(shí)充分的認(rèn)知并在操作規(guī)程中注明，以確保在合理的測(cè)試條件下獲得具有高度重復(fù)性和準(zhǔn)確性的最佳測(cè)試結(jié)果。
注：本文中所使用的旋光光度儀是: 美國(guó)魯?shù)婪蜓芯糠治龉荆≧udolph Research Analytical）的一款自動(dòng)旋光儀 AUTOPOL I ，溫度控制20°C。
